| # | Оригинал (английский) | Перевод (русский) | ||
|---|---|---|---|---|
| 1 | Сожалеем, но текст оригинала доступен только зарегистрированным пользователям. | |||
| 2 | ||||
| 3 | 0Данное исследование было одобрено Этическим комитетом Института науки Токио (№ M2018-006). Все процедуры исследования проводились в соответствии со всеми соответствующими руководствами и нормативными актами. Тела были переданы в дар в соответствии с японским Законом о пожертвовании тел для медицинского и стоматологического образования (Закон № 56 от 1983 года). Все доноры добровольно заявили о своем намерении пожертвовать свои тела в образовательных и научных целях до смерти. Письменное информированное согласие было получено после того, как каждому донору было ясно объяснено назначение и методы использования его тела. После смерти процедура информированного согласия была разъяснена родственникам, которые не возражали. (Mikelangelo)
| |||
| 4 | ||||
| 5 | 0В Институт науки Токио было передано одиннадцать тел (7 мужчин и 4 женщины; средний возраст на момент смерти — 75,5 лет [диапазон 56–88 лет]). Все тела были фиксированы артериальным пропитыванием 8% раствором формалина и сохранены в 30% спирте. Тела с историей операций на органах таза были исключены из исследования. (Mikelangelo)
| |||
| 6 | ||||
| 7 | 0Макроскопическое исследование было проведено на 6 образцах. Тазовая область была изолирована единым блоком. Два таза были рассечены в сагиттальной плоскости, а боковая стенка анального канала — с медиальной стороны. Остальные 4 таза были рассечены в косой коронарной плоскости через аноректальный канал. Такое косое коронарное сечение позволило наблюдать структуры передней и задней стенок без повреждения срединных структур [10, 11]. Для разрезания таза использовалась алмазная ленточная пила для патологических образцов (EXAKT 312, EXAKT Advanced Technologies). Передняя и задняя стенки анального канала были диссекцированы с задней и передней стороны соответственно. Во время диссекции слизистая оболочка была удалена для визуализации мышечной структуры анального канала, что соответствовало методам наших предыдущих исследований [12, 13]. После этого изучали происхождение и локализацию мышцы Трейтца.
(Mikelangelo) | |||
| 8 | ||||
| 9 | 0Гистологическое исследование было проведено на оставшихся 5 образцах. Тазовая область была рассечена в среднесагиттальной плоскости, и из передней, боковой и задней стенок анального канала были собраны блоки тканей. После заливки парафином ткани были нарезаны с толщиной 5 мкм. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, Эластикой ван Гизона и трихромной окраской по Массону. (Mikelangelo)
| |||
| 10 | 0Кроме того, была выполнена иммуноокраска с использованием антител к гладкой мышечной ткани для идентификации гладкомышечных структур. Срезы обрабатывали микроволнами в 10 мМ буфере цитрата натрия (pH 6,0) для восстановления антигенов. Эндогенная пероксидазная активность была инактивирована инкубацией тканей в метаноле с 0,3% H₂O₂ в течение 30 минут. Неселективное связывание блокировали инкубацией в фосфатно-солевом буфере, содержащем 0,05% Tween 20 и 2,5% козьей сыворотки, при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем срезы инкубировали в течение ночи при комнатной температуре с первичными антителами к гладкому актину (готовый к использованию набор, actin, smooth muscle Ab-1, клон 1A4; Thermo Fisher Scientific) и к скелетному миозину (1:200, NBP-1-89,707, антитело к тяжёлой цепи миозина 3, поликлональное; Novus Biologicals). (Mikelangelo)
| |||
| 11 | 0После промывания срезы инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой: против IgG мыши (готовый к использованию, MP-7452, ImmPRESS HRP goat anti-mouse IgG polymer; Vector Laboratories) и против IgG кролика (готовый к использованию, MP-7451, ImmPRESS HRP goat anti-rabbit IgG polymer; Vector Laboratories). Образовавшиеся иммунные комплексы выявляли с помощью 3,3’-диаминобензидина (Fujifilm Wako Pure Chemical), а затем срезы контрастировали гематоксилином в течение 1 минуты. Этот иммуногистологический метод аналогичен нашим предыдущим методикам для исследования ректально-анального канала и эффективен для визуализации распределения гладкомышечной ткани [14, 15]. (Mikelangelo)
|