→Additionally, immunostaining was performed using an anti-smooth muscle antibody to identify smooth muscle tissues. Slides were microwaved in 10 mM sodium citrate buffer (pH 6.0) for antigen retrieval. Endogenous peroxidase activity was inactivated by incubating tissues in methanol containing 0.3% H2O2 for 30 minutes. Nonspecific binding was blocked by incubation with phosphate-buffered saline containing 0.05% Tween 20 and 2.5% goat serum at room temperature for 30 minutes. Sections were then incubated overnight at room temperature with primary antibodies against smooth actin (ready-to-use actin, smooth muscle Ab-1, clone 1A4; Thermo Fisher Scientific) and skeletal myosin (1:200, NBP-1-89,707, myosin heavy chain 3 antibody, polyclonal; Novus Biologicals).
0Кроме того, была выполнена иммуноокраска с использованием антител к гладкой мышечной ткани для идентификации гладкомышечных структур. Срезы обрабатывали микроволнами в 10 мМ буфере цитрата натрия (pH 6,0) для восстановления антигенов. Эндогенная пероксидазная активность была инактивирована инкубацией тканей в метаноле с 0,3% H₂O₂ в течение 30 минут. Неселективное связывание блокировали инкубацией в фосфатно-солевом буфере, содержащем 0,05% Tween 20 и 2,5% козьей сыворотки, при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем срезы инкубировали в течение ночи при комнатной температуре с первичными антителами к гладкому актину (готовый к использованию набор, actin, smooth muscle Ab-1, клон 1A4; Thermo Fisher Scientific) и к скелетному миозину (1:200, NBP-1-89,707, антитело к тяжёлой цепи миозина 3, поликлональное; Novus Biologicals).